Entrez dans le monde de la chimiluminescence

Qu'est-ce que la chimiluminescence

Le terme « chimiluminescence » a été inventé pour la première fois par Eilhardt Weidemann (1888). La chimiluminescence, phénomène observé lorsqu'un produit qui a été stimulé de manière exogène dans un état excité, se détend jusqu'à son état fondamental et émet des photons, peut être définie en termes simples : l'émission de lumière dans une réaction chimique.

Contexte historique de la chimiluminescence

Une avancée majeure par rapport aux tests immunologiques traditionnels a été le travail pionnier de Yalow et Berson, les scientifiques américains qui ont utilisé pour la première fois le test radioimmunologique (RIA) pour la détermination de l'insuline en 1959. Depuis les années 1970, diverses méthodes sans radiomarquage ont été progressivement développées. En 1977, Tsuji et coll. développé un test immunologique non radiomarqué basé sur les principes de base du test radioimmunologique, utilisant le luminol marqué comme signal traceur. La chimiluminescence des enzymes a été combinée à la réaction immunitaire pour développer le test immunologique par chimiluminescence (CLIA).

Avantages de la technologie de dosage immunologique chimiluminescent

Les avantages de CLIA par rapport à RIA, EIA et FIA sont

(1) Aucun risque de rayonnement ;

(2) Haute sensibilité, avec une plage de détection linéaire de 6 ordres de grandeur et une limite inférieure de 10 à 21 mol ;

(3) Marqueurs luminescents stables avec une longue validité ;

(4) opération automatisée facile à réaliser ;

(5) Large gamme d'applications, peut détecter des antigènes, des semi-antigènes et des anticorps de différentes tailles moléculaires, et peut également être utilisé pour la détection de sondes d'acide nucléique.

Principes de base du test immunologique par chimiluminescence

L'analyse par chimiluminescence est une combinaison de chimiluminescence et d'immunoessai. Il offre à la fois la haute sensibilité de la chimiluminescence et la haute sélectivité du test immunologique. Le CLIA implique le marquage d'un antigène ou d'un anticorps avec un réactif chimiluminescent (luminol ou catalyseur, etc.), le marquage de l'antigène/anticorps et de la substance à mesurer après une série d'étapes immunologiques et physico-chimiques (centrifugation, lavage, etc. ), et la détermination finale de la substance à mesurer sous forme d'intensité de luminescence.
Prenons comme exemple la méthodologie de luminescence directe de l'ester d'acridine de Getein : les anticorps sont marqués séparément avec de l'ester d'acridine et des billes magnétiques, et après la réaction immunoconjuguée entre l'anticorps marqué et l'antigène dans la substance à tester, un anticorps-antigène recouvert de billes. Un complexe d’anticorps marqué à l’ester d’acridine se forme. Il suffit d’ajouter un agent oxydant pour créer un environnement alcalin avec NaOH, et l’anachorite d’acridine peut alors émettre directement de la lumière. L'énergie photonique produite par unité de temps est enregistrée et la quantité de substance à mesurer peut être calculée à partir de la courbe standard.

Principaux types de tests immunologiques chimioluminescents

Selon le marqueur, le CLIA peut être divisé en trois catégories principales : les immunoessais par chimiluminescence directe, par chimiluminescence enzymatique et par électrochimiluminescence.

Chimiluminescence directe

Les réactifs chimioluminescents au luminol et à l'acridine sont les marqueurs de luminescence les plus couramment utilisés.

Le luminol, l'isoluminol et leurs dérivés ont été l'une des premières substances luminescentes courantes utilisées dans la CLIA et la luminescence de ces substances est oxydante. Dans des conditions alcalines, il est oxydé par H2O2 sous catalyse HBP pour produire un intermédiaire excité, qui émet un photon lorsque la phase revient à l'état fondamental.

En 1935, on a découvert que la lucigénine avait des propriétés chimiluminescentes, et plus tard de nombreuses acridines possédaient cette propriété. Ces composés peuvent produire rapidement une chimiluminescence avec des rendements quantiques élevés tant qu’ils sont en présence de H2O2 et OH-. La chimie des esters d'acridine utilisés comme marqueurs pour les tests immunologiques est simple, rapide, ne nécessite aucun catalyseur et présente des efficacités de marquage et de luminescence élevées.

Le tout dernier produit de Getein, le MAGICL 6000, est un instrument de chimiluminescence compact et entièrement automatisé qui utilise ce marqueur pour améliorer considérablement l'efficacité de l'utilisation finale tout en conservant la précision et la sensibilité. Il a été utilisé dans une large gamme d'applications dans 13 domaines, notamment les tumeurs, la thyroïde. , et des marqueurs cardiaques. 

Test immunoenzymatique par chimiluminescence (CLEIA)

CLEIA est un dosage immunoenzymatique du point de vue du dosage immunologique de marquage, sauf que le substrat de la réaction enzymatique est le luminol : l'enzyme marque la substance biologiquement active pour le dosage immunologique, l'enzyme du complexe du dosage immunologique agit alors sur le substrat luminol et le signal du luminol est mesuré pour une analyse quantitative.

Actuellement, les marqueurs couramment utilisés sont le HRP et l’ALP, tous deux dotés de leur propre substrat luminescent.

Test immunologique par électrochimiluminescence (ECL)

L'ECL est un processus de chimiluminescence provoqué par une réaction électrochimique. Lorsqu'une certaine tension ou courant est appliqué à une électrode, une réaction électrochimique se produit au niveau de l'électrode et les produits de réaction entrent dans l'état excité par réaction chimique entre les produits de réaction d'électrode, ou entre les produits de réaction d'électrode et un composant de la solution. et la luminescence est produite lorsque l'état excité revient à l'état fondamental.

CLIA présente les avantages d’une sensibilité élevée et d’une bonne spécificité et est de plus en plus favorisée par les tests cliniques. De plus, CLIA dispose d'une large gamme de méthodes analytiques et est largement utilisée pour le dosage immunologique d'antigènes, d'anticorps et de semi-antigènes, et sa gamme linéaire est relativement large pour répondre aux besoins cliniques. Getein propose désormais un menu complet de plus de 100 tests de marqueurs dans 13 domaines. L'automatisation complète du processus et une conception à double bac à consommables permettent des changements de consommables non-stop, permettant une meilleure efficacité des tests ; avec une vitesse de mesure de 150 T/H, tout en garantissant des dosages précis sur sang total, il offre aux laboratoires une solution de chimiluminescence compacte et innovante.